Сheatsplace.ru

Медицина и лекарственные средства

Методы лабораторной диагностики вирусного гепатита В

Расчет

По оптической плотности пробы в калибровочном графике находят концентрацию фермента.

Предупреждение

Пробы сыворотки крови можно хранить при температуре (от +2 до +8)°С в течении одной недели.

При каталитической концентрации фермента свыше 0,56 мккат/л анализ проводят с сывороткой, разбавленной физиологическим раствором (результат умножить на разведение).

При кат. концентрации фермента

Разведение

(0,56 - 0,70)

(0,70 - 0,80)

(0,80 - 1,00)

10х

(1,00 - 1,20)

30х

Свыше 1,20

50х

Повышенное содержание кетоновых тел (в сыворотках диабетиков) вызывает повышение активности ферментов АсАТ и АлАТ. В таких случаях необходимо вычесть из оптической плотности пробы оптическую плотность сывороточного контрольного раствора. Сывороточный контрольный раствор приготавливают точно так же, как и пробу, с той лишь разницей, что сыворотку добавляют в пробирку после реактива 2.

Гемолиз повышает каталитическую концентрацию ферментов АсАТ и АлАТ. Снижение результатов вызывают синтетические моющие средства (сапонаты).

Референтные величины

АсАТ (мккат/л) 0,06-0,14

Предельные величины 0,42

Метод определения активности аланинаминотрансферазы (К.Ф. 2.6.1.1.) в сыворотке крови динитрофенилгидразиновым методом (по Райтману, Френкелю, 1957)

Принцип метода

Аланинаминотрансфераза (

L

-аланин: 2-оксоглутарат аминотрансфераза, К.Ф. 2.6.1.2.)

катализирует реакцию между L-аланином и 2-оксоглутаратом, в результате которой они превращаются в L-глутамат и соль пировиноградной кислоты. Определение основано на измерении оптической плотности гидразонов и 2-оксоглутаровой и пировиноградной кислоты в щелочной среде. Гидразон пировиноградной кислоты обладает более высокой оптической плотностью.

Реактивы

1. Эталонный раствор натрий пировинограднокислый 2 ммоль/л;

2. 2,4 - динитрофинилгидразин раствор 1 ммоль/л в НСl 1 моль/л;

3. Натрий гидроокись;

4. Субстрат АлАТ:

фосфатный буфер 0,1 моль/л;

DL-альфа-аланин 0,2 моль/л;

2-оксаглуторат 2 ммоль/л;

. 0,9% р-р NaCl.

Приготовление рабочего раствора

Раствор гидроокиси натрия

В мерной колбе вместимостью 1000 мл растворяют в дистиллированной воде содержимое флакона с Реактивом 3. Раствор устойчив.

Ход определения

Ингредиенты (мл)

Проба

Контрольный раствор

Субстратный раствор АлАТ

0,5

0,5

Физиологический раствор

-

0,1

Предварительно инкубируют в течении 3 мин при 37°С

Сыворотка крови

0,1

-

Перемешивают, инкубируют точно 60 мин при 37°С

2,4 - ДНФГ

0,5

0,5

Перемешивают и оставляют стоять 20 мин при температуре (от + 15°С до +25°С)

0,4н NaOH

5,0

5,0 Перейти на страницу: 1 2 3 4 5 6 7 8 9