Сheatsplace.ru

Медицина и лекарственные средства

Методика определения активности аминотрансфераз

Активность АлАТ определяли с помощью тест-набора «Лахема».

Определение основано на измерении оптической плотности гидрозонов а -оксоглутаровой и пировиноградной кислоты в щелочной среде, возникающей при самопроизвольном декарбоксировании оксал-ацетата, обладает более высокой активностью.

Реактивы:

Субстрат АлАТ - DL-альфааланин 116 ммоль/л. 2 оксоглутарат 1,7 ммоль/л. фосфатный буфер рН 7,4 83 ммоль/л.

Реактив 2 - 2,4 динитрофенилгидрозин - р-р 1 ммоль/л в HCL 1 ммоль/л.

Раствор NaOH - 16 г/ 1л.

Раствор NaOH - 16 г/ 1л.

Физиологический раствор NaCl ( 900 мг/100 мл).

Проведение анализа.

Отмерить (мл).

Проба

Контрольный раствор

Субстрат АлАТ Физиологический р-р.

0,25

0,25 0,05

Инкубация точно 3 мин. при т-ре 37°С

Сыворотка крови

0,05

-

Инкубация точно 60 мин. при т-ре 37°С

Реактив 2.

0,25

0,25

Инкубация 20 мин при комнатной температуре.

Раствор NaOH

2,50

2,50

Перемешивают и спустя 10 мин. измеряют оптическую плотность пробы против контрольного раствора. Измерение проводят на СФ - 46 при длине волны 530 нм.

Калибровочный график (СФ - 46Д = 530).