Сheatsplace.ru

Медицина и лекарственные средства

Результаты

В нашей работе была получена степень эффективности ингибитора (противовирусного препарата) методами ФОЕ (стандартный вирусологический метод) и флуоресцентной детекции. Обработка результатов ингибирования фокусов и интенсивности флуоресценции системой пробит- анализа позволяет находить необходимый параметр IC50, а также сравнивать различные методики для его нахождения.

На рисунке 19 представлены полученные IC50 для ингибитора фетуин методами ФОЕ и флуоресцентной детекции, которые не отличаются на уровне значимости 5%. Данные о степени эффективности ингибитора приведены ниже в таблице 3.

Также при решении обратной задачи метода флуоресцентной детекции были получены кинетические параметры системы «вирус- клетка», полученные для данного вируса Aichi и клеток линии MDCK методом ИФА. Данные о кинетических константах также приведены ниже в таблице 3.

Таблица 3 Кинетические параметры, полученные различными методами (*)

метод

T0C

k+, М-1·s-1

k-, М-1·s-1

kin, М-1·s-1

tнасыщ, min

IC50, М

ФОЕ

37

-

-

-

-

Флуоресц. детекции

37

(2,5±0,2)·108

(6,6±0,5)·10-4

(5±0,3)·10-3

2,6±0,4

ИФА

32

(1±0,1)·105

(3±0,4)·10-4

(2±0,2)·10-4

30±2

-

ИФА

10

(3,3±0,3)·104

(1±0,1)·10-4

0

-

-

(A/PR8/34)+ MDCK*

20

-

-

2,6·10-4

-

-

Полученные значения, приведенные в таблице 3 хорошо согласуются между собой: при увеличении температуры возрастают k+ и kin (за счет повышения пластичности мембраны клетки (можно сказать ее плавления), что приводит большей гибкости и в конечном итоге к более быстрому (за счет этого с ростом температуры уменьшается tнасыщ) и более крепкому взаимодействию нескольких рецепторов с одним вирионом).

k - остается практически неизменным.

kin возрастает резко: от отсутствия эндоцитоза при 100С до резкого увеличения на порядок при 370С (в сравнении с 320С).

Однако, существенные различия между параметрами, полученными данными методами можно объяснить тем, что во всех методиках, кроме флуоресцентной детекции (ФОЕ, ИФА, ) использовался клеточный монослой, тогда как в методе флуоресцентной детекции для насыщения системы клеточными рецепторами, использовалась клеточная суспензия, что объясняет самую быструю адсорбцию вируса на клетку.

Таблица 4 Сравнительная характеристика методов ФОЕ, ИФА и флуоресцентной детекции на основании полученных результатов

метод

IC50

in(t)

s(t)

tнасыщ

kd(Vi+ing)

kd(Vi+cells)

Рабочее время

ФОЕ

+

-

-

-

-

-

-

~24ч.

ИФА

-

-

+

+

+

+

+

~1,5ч.

Фл. детекции

+

+

+

+

+

+

+

~30м. Перейти на страницу: 1 2